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雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)
作者:管理 發(fā)布時(shí)間:2022-06-23 17:34:33
利用熒光素酶與底物結(jié)合發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的特點(diǎn),把感興趣的基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因(firefly luciferase)的上游,構(gòu)建成熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)化煙草,測(cè)定熒光素酶活性。通過熒光素酶活性的高低判斷性刺前后或不同刺激對(duì)感興趣的調(diào)控元件的影響。為了減少內(nèi)在的變化因素對(duì)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性的影響,將帶有海腎熒光素酶基因(Rinilla luciferase)的質(zhì)粒作為對(duì)照質(zhì)粒與報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)化,提供轉(zhuǎn)錄活力的內(nèi)對(duì)照,使測(cè)試結(jié)果不受實(shí)驗(yàn)條件變化的干擾。